产品货号：
BTN15-13700
中文名称：
呼吸道合胞病毒(RSV)荧光定量RT-PCR试剂盒(探针法)
英文名称：
Respiratory Syncytial Virus RT-qPCR Kit(Probe Method)
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本制品是以探针法荧光定量RT-PCR技术为基础开发的专门检测呼吸道合胞病毒的试剂盒。
呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus,RSV)属于副黏病毒科的肺病毒属(Pneumovirus)，病毒形态为球形，直径为120～300nm，有包膜，基因组为非分节段的单负链RNA，编码10种蛋白质，只有一种血清型，主要引起6个月以下婴儿患细支气管炎和肺炎等下呼吸道感染，以及较大儿童和成人的鼻炎、感冒等上呼吸道感染。因此快捷灵敏地对其诊断具有重要意义。
保存：-20℃，有效期2年。
引物-探针干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入162μL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。
一、稀释标准曲线样品(以101～106拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本制品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
二、样品RNA的制备
三、Probe qRT-PCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
四、数据处理
相关搜索：呼吸道合胞病毒(RSV)荧光定量RT-PCR试剂盒(探针法)，呼吸道合胞病毒，RSV病毒，核酸检测，荧光定量，探针法，RT-qPCR，qRT-PCR，检测试剂盒
呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus,RSV)属于副黏病毒科的肺病毒属(Pneumovirus)，病毒形态为球形，直径为120～300nm，有包膜，基因组为非分节段的单负链RNA，编码10种蛋白质，只有一种血清型，主要引起6个月以下婴儿患细支气管炎和肺炎等下呼吸道感染，以及较大儿童和成人的鼻炎、感冒等上呼吸道感染。因此快捷灵敏地对其诊断具有重要意义。
- 即开即用，用户只需要提供样品RNA模板。
- 引物和探针经过优化，灵敏性高，可以达到100拷贝/反应。
- 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
- 特异性高，引物是根据呼吸道合胞病毒RNA高度保守区设计，不会跟其他病毒RNA发生交叉反应。
- 既可以用于定性，又可用于定量。用于定量时其线性范围不少于五个数量级。
- 本制品足够50次20μL体系的探针法荧光定量RT-PCR反应。
- 本制品只能用于科研。
| 组分 | 规格 |
| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |
| 探针法qRT-PCR酶混合液v2 | 50μL |
| 荧光PCR模板专用稀释液 | 1mL |
| 呼吸道合胞病毒探针法引物-探针干粉 | 50次 |
| 呼吸道合胞病毒探针法阳性对照(1×107拷贝/μL) | 50μL |
保存：-20℃，有效期2年。
引物-探针干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入162μL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。
一、稀释标准曲线样品(以101～106拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本制品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
- 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2，1。
- 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同)。
- 在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×106拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在5号管中加入5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在4号管中加入5μL 1×105拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×104拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品RNA的制备
- 如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步所得4号稀释液再加上一定量的水使总体积跟核酸制备试剂盒所要求的起始样本体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
- 用自选方法纯化样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。
三、Probe qRT-PCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
- 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个RT-PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于RT-PCR阴性对照(用水做模板)，6个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做1次重复，则标记N+4个RT-PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于RT-PCR阴性对照(用水做模板)，1个用于RT-PCR阳性对照(直接用第6步第4号管的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
- 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加)：
成分 样品管
N+2个RT-PCR
阴性对照管标准曲线样品管
(1～6管)探针法qRT-PCR缓冲液 各10μL 10μL 各10μL 探针法qRT-PCR酶混合液v2 各1μL 1μL 1μL 呼吸道合胞病毒RT-PCR引物-探针混合液 各3μL 3μL 各3μL 待测样品RNA模板 各6μL 不加 不加 超纯水 不加 6μL 不加 第6步所得标准曲线样品稀释液(1～6号) 不加 不加 各6μL - 盖上盖子后上机，按下面参数进行RT-PCR：
过程 温度 时间 逆转录 50℃ 10min 预变性 95℃ 5min PCR反应
(40个循环)95℃ 15sec 60℃ 60sec(采集FAM通道的荧光信号，淬灭基团为BHQ)
四、数据处理
- 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品RNA浓度的log值，再推算出其浓度。
- 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照必须无Ct或Ct大于或等于35。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于35，否则实验无效。如果实验有效，则分析待测样品，如果无Ct或Ct大于或等于35，则为阴性。如果Ct小于35则为阳性。
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